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產(chǎn)品展示
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III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉錄

  • 型   號:71500
  • 價   格:
  • 更新時間:2025-04-23
  • 廠家性質:經(jīng)銷商

Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit(With dsDNase)采用第三代高效逆轉錄酶,具有更強的延伸能力和穩(wěn)定性,并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase,只需一步操作, 即可同時完成基因組清除與逆轉錄反應,操作方便快捷。逆轉錄產(chǎn)物可以用于PCR,克隆基因
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉錄

Script III lncRNAcDNA Synthesis KitWith dsDNase

lncRNAcDNA 第一鏈合成試劑盒(去基因組)

 

III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉錄

目錄號:71500

產(chǎn)品內容

Components

71500-50

25 rxns (20 μl/rxn)

71500-100

100 rxns (20 μl/rxn)

5x TRUE Reaction Mix

100 μl

400 μl

dsDNase

25 μl

100 μl

lncRNA-RT primer

25 μl

100 μl

RNase free H2O

1 ml

1.5 ml

保存條件:-20℃保存,有效期 12 個月。

產(chǎn)品簡介

Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit(With dsDNase)采用第三代高效逆轉錄酶,具有更強的延伸能力和穩(wěn)定性,并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase,只需一步操作, 即可同時完成基因組清除與逆轉錄反應,操作方便快捷。逆轉錄產(chǎn)物可以用于PCR,克隆基因;也可以用于qPCR,兼容染料法和探針法,用來檢測高拷貝或低拷貝基因。

lncRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒是專門針對長鏈非編碼RNA(lncRNA)反轉錄而開發(fā)的產(chǎn)品。與 mRNA 相比,lncRNA具有豐度低、GC 含量差異大、二級結構更復雜等特性,傳統(tǒng)反轉錄試劑lncRNA 難以達到理想的效果。本試劑盒含有高效去除基因組 DNA dsDNase,可有效避免殘留的基因組DNA 對后續(xù)檢測結果的干擾。本試劑盒中中使用的反轉錄酶是通過分子改造后的新型反轉錄酶,具有更強的 RNA 親和性和熱穩(wěn)定性,使本試劑盒在通讀 GC 含量高,二級結構復雜,低豐度的 RNA 模板和抗逆性等方面表現(xiàn)突出,特別適合表達水平相對較低,二級結構相對復雜的 lncRNA 的反轉錄反應。

操作步驟:第一連cDNA合成 (以20 μl反應體系為例)

1.反應體系的配制

使用 RNase-Free PCR 管在冰上配制:(使用前,請將各組分輕彈混勻,點甩離心收集至管底,置冰上備用。)

Components

Volume

Total RNA/mRNA

50 ng - 5 μg / 5 ng -500 ng

lncRNA-RT primer

1 μl

5x TRUE Reaction Mix

4 μl

dsDNase

1 μl

RNase free H2O

To 20 μl

2.輕柔吸打混勻,點甩離心,置 PCR 儀進行逆轉錄反應。

25℃孵育 10 min 后,產(chǎn)物用于 PCR,42℃孵育 30 min;產(chǎn)物用于 qPCR,42℃孵育 15 min。

注意:如果模板具有復雜二級結構或高 GC 區(qū)域,可以先只加 RNA 模板、引物和 RNase free H2O,混勻,65℃變性 5 min,冰上冷卻,點甩離心后加入其它成分,將 42℃孵育溫度提升至 50°C,有助于提高產(chǎn)量。

3. 85°C加熱 5 sec,失活RTasedsDNase,終止反應。

逆轉錄產(chǎn)物可立即用于PCR或qPCR反應,或保存于-20°C,并在半年內使用;長期存放建議分裝后在-70°C保存,cDNA應避免反復凍融。

PCR建議取2 - 4 μl的cDNA產(chǎn)物原液作為PCR模板。)

1. 常規(guī)擴增: 71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)

2. 高保真擴增:71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb,15sec/k)

qPCR(建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應體系的模板。如果基因表達量較高,可以根據(jù)實際情況適當稀釋cDNA模板后使用。)

III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉錄

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